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低温离心机提取RNA酶的注意事项

2014/2/12 15:52:27??????点击:

RNA酶无处不在,在实验操作的任何一步,任何偶然的疏忽或不妥当的操作都有可能造成RNA酶的污染,从而导致整个实验的失败。因此,严格控制实验条件,避免任何可能的污染,是保证实验成功的关键。为此,必须作到以下几点:

1.如果可能,实验室应专门辟出RNA操作区,卢湘仪低温离心机,移液器,试剂等均应专用。RNA操作区应保持清洁,并定期行除菌。

2.如果可能,在超净台中按照细胞培养的要求进行操作,可以有效避免操作中引起的RNA酶污染。

3.操作过程中应始终戴一次性橡胶手套,并经常更换,以防止手、臂上的细菌和真菌以及人体自身分泌的RNA酶带到试管或污染用具,尽避免使用一次性塑料手套。塑料手套不但常常造成操作不便,且塑料手套的多出部分常常在器具的RNase污染处和RNase-free处传递RNase,扩大污染。

4.避免在操作中说话聊天。也可以戴口罩以防止引起RNA酶污染。

5.尽量使用一次性的塑料制品,尽量避免共用器具如滤纸,tips,tubes等,以防交叉污染。例如,从事RNA探针工作的研究者经常使用RNase H,T1等,在操作过程中极有可能造成移液器、离心机等的污染。而这些污染了的器具是RNA操作的大敌。

6. 关于一次性塑料制品,建议使用厂家供应的出厂前已经灭菌的tips和tubes等。多数厂家供应的无菌塑料制品很少有RNA酶污染,买来后可直接用于RNA操作。许多研究者用DEPC等处理的塑料制品,往往由于二次污染而带有RNA酶,从而导致实验失败。

7.配制溶液用的酒精、异丙醇、Tris等应采用未开封的新瓶。

8.所有旧塑料制品都必须用0.5M的NaOH处理10分钟,用双蒸水彻底冲洗,DEPC-H20浸泡过夜后灭菌。

9.无法用DEPC处理的用具可用氯仿擦拭若干次,这样通常可以消除RNA酶的活性。但氯仿会溶解某些塑料制品,应当注意。

10.RNase AwayTM试剂可以替代DEPC,操作简单,价格低,且无毒性。只需将RNase AwayTM直接倒在玻璃器皿和塑料器皿的表面,浸泡后用水冲洗去除,即可以快速去除器皿表面的RNase,并且不会残留而干扰后继实验。

11.如果您需要远距离运输或长期储藏RNA样品,建议先将标本(细胞、组织)保存在RNA保存液(RNAwait、RNAlater)中,使细胞内的RNA与RNA酶分离,在室温可以保存7天,4℃可以保存4周,-20℃、-80℃可以长期存档保存标本,RNA质量不受影响,用各类方法抽提仍可以获得高质量的RNA。

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