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液相色谱法测定水产品中的抗生素残留

2015/3/9 11:25:27??????点击:

1、仪器与试剂

  HP1100型高效液相色谱仪,G1315A DAD 二极管阵列检测器,G1313A ALS自动进样器;SUPELCO DISCOVERY C185μm 250×4.6mm色谱柱。固相萃取小柱为ZORBAX SPE C18Cart。12头固相萃取真空富集装置(Alltech Scientific Limited)。超声波清洗器KS—500D,超速离心机Gl-25M,搅肉机,涡旋混合器。甲醇(色谱纯),磷酸二氢钠(分析纯),EDTA(分析纯),高氯酸溶液(优级纯)、硝酸(优级纯)。土霉素、四环素、金霉素、氯霉素标准品(SIGMA企业)。

  2、高效液相色谱分析条件

  色谱柱为SUPELCO DISCOVERY C185μm 250×4.6mm,流动相为0.O1mol/L磷酸二氢钠+0.001 mol/L EDTA:甲醇=60:40(V/V,pH=2.0),流速为0.8ml/min,检测波长为268nm柱温为25℃,进样量为20μl。

  3、实验方法

  (1)土霉素、四环素、金霉素、氯霉素标准储备液的配制

  分别称取O.0100mg土霉素、四环素、金霉素、氯霉素标准品置于4个1Oml容量瓶中,分别加入甲醇溶解并定容至刻度,此溶液浓度分别为1.00mg/ml,置于冰箱冷藏室保存。

  (2)混合标准中间液的配制

  分别汲取土霉素、四环素标准储备液各1.00ml,金霉素、氯霉素标准储备液各 2.00m1.置于100ml容量瓶中,用流动相A液定容至刻度,此溶液浓度分别为:土霉素(10μg/m1)、四环素(10μg/m1)、金霉素(20μg/m1)、氯霉素(20μg/m1),置于冰箱冷藏室保存。

  (3)标准使用液的配制

  准确汲取混合标准中间液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、 8.0、10.0ml分别置于1Oml容量瓶中,用流动相A液定容至刻度,得到的标准系列为:0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、 8.0、10.0μg/m1(土霉素、四环素);0.2、0.4、1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、16.0、20.0μg/m1(金霉素、氯霉素)。

  (4)流动相A液的配制

  0.01mol/L磷酸二氢钠+0.001mol/L EDTA,用30%硝酸调至pH=2.0,经0.45μm双层水系滤膜过滤。

  (5)流动相B液的配制

  0.01mol/L磷酸二氢钠,用30%硝酸调至pH=2.0,经0.45μm双层水系滤膜过滤。

  (6)样品前处理

  准确称取5.00g搅碎的水产品于5Oml带盖的塑料离心管中,加入20%高氯酸溶液 15ml,涡旋1min,将此离心管放入超声波清洗器中提取20min后,用离心机离心10min,收集上清液于25ml容量瓶中,往残渣中加入1Oml 2%高氯酸溶液,用玻棒搅动使样品均匀分散于高氯酸溶液中,将此离心管放入超声波清洗器中提取20min后,用离心机离心10min,收集上清液于上述 25ml容量瓶中,合并两次上清液,用2%高氯酸溶液定容,取该提取液1O ml经已调节的固相萃取小柱吸附,用10%甲醇水2ml冲洗固相萃取小柱,用50%甲醇水1ml洗脱后收集备用。

  (7)样品测定

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