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低速离心机制备细胞膜的分离实验

2014/10/27 10:35:58??????点击:
试剂:生理盐水,0.25mol/L 蔗糖溶液(含0.3mol/LCacl2),0.34mol/L 蔗糖溶液(含0.3mol/LCacl2);器件:常规的分离细胞膜的。
1)取空腹12h雄鼠(150g),断头处死,放血。剖解取肝脏,迅速用生理盐水洗净,用滤纸吸干。取3g肝脏剪碎,经冷的0.25mol/L 蔗糖溶液洗涤数次,加18ml预冷0.25mol/L 蔗糖溶液匀浆,用双层尼龙膜过滤,备用。
2)将匀浆的放入离心管中,沿壁小心加入等体积的0.34mol/L 蔗糖溶液覆盖于样品上,以700g离心10min.
3)将离心沉淀以0.25mol/L 蔗糖溶液洗涤, 1000g(3500r/min)离心10min,重复一次。
4)离心后沉淀为细胞核,其上有一较疏松的上层,小心吸出此上层,悬于密度d20为1.16的蔗糖溶液(51g/L)中,移入离心管,沿壁加密度d20为1.18的蔗糖溶液(51.5g),覆盖在样品层上层。700g(3000r/min)离心10min,细胞膜组分位于两层溶液界面,小心吸出,置低温保存,以备进一步分析。
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